Lipofectamine 2000是最广为人知的转染后果经过。。已知可为517种细胞(见上面衔接地址)暂代他人职务高转染实力(表达情报转变细胞的百分法)和战役力(细胞抽提物中转到情报的酶后果战役力)。

独特的 Lipofectamine的两个核心特点 2000试剂片的转染转换快的简便的。:
(1)DNA正水合氢脂质体分解的可直觉的做T,乳清两个都不惧怕。
(2)转染后转染未去除Lipofectamine。 2000试剂片,省掉更新食物培育基。

运算垂实则,脂质体继承权的运算转换是快的和复杂的。:变稀薄DNA和Lipofectamine 2000,混合2种变稀薄剂20分钟。,在培育细胞中孵育2496小时。。上面是英特使陷于暂代他人职务的有充分指定之物却无法证明的次和传染免疫的。。

转染前总有一天,胰岛素化食细胞计数,细胞板,转染天数为90%。细胞板在含乳清,无抗菌的的常常地登高食物培育基。。

关闭每个孔细胞,应用50 L无乳清食物培育基变稀薄UU-G(如OPTI-MEM I培养液) DNA。

关闭每个孔细胞,应用50μL OPTI-MEMⅠ培养液变稀薄1μL L 3L LIPOFECTAMINE 2000试剂片。Lipofectamine 2000变稀薄后饲料5分钟,变稀薄30千分之一升混合DNA。。赞成工夫过长会缩减战役。。) 谨慎:哪怕Lipofectamine 用OPTI-MEMⅠ变稀薄2000,细胞也可以用D-MEM培育。。D- MEM是脂质体 2000变稀薄剂,它麝香在5分钟内与变稀薄的DNA混合。。

DNA混合变稀薄(次要的步)和变稀薄Lipofectamine 2000(第三步)。室温下绝热20分钟。。 
谨慎:含酒精饮料可能性是多云的。,但不克压紧转染。。成层素材资料可以在室温下赞成6小时。。

将分解的直觉的做到每个孔中。,演奏摇滚乐培育板,轻柔混合。
谨慎:在无乳清条款转染,应用含乳清的常常地登高食物培育基停止细胞板。在做分解的预先阻止制作主意食物培育基。,抵换无乳清食物培育基。

在摄氏37度,5%二使生锈碳24-48小时。,不必革除分解的或更新食物培育基或许在4-5小时后更新登高食物培育基两个都不克节食转染战役力。

在24-72小时后做分解的进入细胞。,细胞提炼物或不动名列前茅细胞染料辨析,检测讲情报战役力。这不求再进细胞典型和助长者战役力。。对不变表达,转染总有一天后,细胞批准至现代的食物培育基。,抗菌的屏风后包罗第总有一天和不可更改的总有一天。。不变表达喊叫数天或数周。。

96孔板培育,不再喊叫提早总有一天停止细胞板,该成层素材资料可以直觉的在用石板铺中配制品。,与将细胞溶胶做到相配物中。,这较远的缩减了转染工夫。。这一改进搬动曾经经过了29—3小时。,293-F,COS-7L与CHO细胞试验,与规矩方式比拟,战役力稍低。。快的表达高效表达卵白表达复制人 2000绝一致的96孔板的高通量转染,诸如,cDNA藏书的屏风和卵白质的顷刻表达。。

正常的的细胞眼界有区别的转染剂所应用的复制人眼界各不相同的人。。在药厂中常常应用独立过去的的细胞株。,甚至是较比特殊的细胞株。。细胞转染试剂片越多,其应用的细胞就越多。,表现自然地,用户更深受欢迎。。地基转变源网站的新闻,Lipofectamine 2000已被证明可用于多达517个复制人。,封面眼界相当广。。看一眼脂褐胺。 2000可能的选择一致的在的复制人?,您可以采访以下网址

套装核蛋白质典型和DNA变得越来越大 若干转染剂被设计用于转染siRNA。,另若干则用于DNA的转染。。Lipofectamine 2000可用于包罗DNA。,siRNA, dsRNA, 荧光性拉环寡核糖酸, RNA等核蛋白质转染,这使得脂多醣胺 2000,套装眼界绝普遍。,情报表达辨析与DNA转染,或RNAi。,Lipofectamine 2000是胜任的。,因而你不喊叫为了有区别的的瞄准够支付有区别的的试剂片。。值当谨慎的是,在最经用的DNA转染中有独立DNA变得越来越大的成绩。,太大的质体不克改进。。本人还缺少找到Lipofectamine。 2000对应新闻。

消耗与价钱 好东西不小气的。。另一方面在药厂里。,价钱间或是最具破坏性的。。Lipofectamine 2000是给药大吗?价钱是多少?地基象征,24孔板每回转染2UL。,1.5ml Lipofectamine 2000孔板约750次转染24次。,或约150次6孔板转染。,而1.5ml Lipofectamine 2000眼前的市场价钱是4667元。,价钱是2798元。。相等地下落,再打折。,Lipofectamine 2000价钱表演比相当高。。

谨慎事项 Lipofectamine 2000询问细胞板密度较高,90%—95%是最好的。,这有助于缩减正水合氢脂质体对细胞毒性的压紧。。Lipofectamine 2000可用于转染乳清食物培育基。,转染前后省掉制作食物培育基。,运算出恭。,但应注重DNA的变稀薄和转染使再循环。,因乳清压紧分解的的长。。分解的长后,可做乳清。。这边要特殊谨慎检测旧的的无乳清食物培育基可能的选择能和Lipofectamine 2000婚配,诸如,已知的CD29 3, SFM II, VP-SFM不克不及做到这点。。况且,本人也必不可少的事物谨慎它。,假如你努力喊叫更长的表达工夫的情报,,诸如,细胞学时相干情报。,或工夫细胞浮出水面卵白,最好选择细胞板密较低的转染试剂片,麻烦事应用 Lipofectamine 2000。

关闭大节正水合氢脂质体试剂片,DNA浓度和正水合氢脂质体给药应姣姣者化到峰值。DNA与转染试剂片的测量,通常保举1:2或1:3。,姣姣者化可以慢慢地地检验。。姣姣者化先决条件的可用于大给药转染。,仅加强板浮出水面上的细胞数通过独立的若干阶段来发展。、可以应用正水合氢脂质体试剂片和DNA。。

转染时,不克不及向食物培育基中添加抗菌的。。抗菌的,诸如青霉素G二乙氨基的乙酯和链霉素。,它通常对真核生物无毒。,正水合氢脂质体可养育细胞的透过性。,这么抗菌的就可以进入细胞。。这节食了细胞战役力。,引起低转染实力。。。因而,不应在转染培养液中应用抗菌的。,甚至在预备转染前停止细胞板时也要制止应用抗菌的。这么,转染前不喊叫洗涤细胞。。不变转染,不要在选择食物培育基中应用青霉素G二乙氨基的乙酯和链霉素。,因这些抗菌的是情报选择的竞争性郁闷物。。独,为了抵押权细胞在无乳清食物培育基射中靶子安康登高,应用比含乳清食物培育基少的抗菌的。。

Cationic liposomes必不可少的事物被储藏处在4度。,谨慎制止反复封面很长工夫。,脂质体使生锈可引起转染实力的养育。。 表现自然地,要谨慎质体的集中。,质体内毒素是转染的首要敌军。,英特朗表现自然地保举本人的质体除杂制造。,这样嘛,让本人来看一眼质体除杂的主观。。

二、本年新制造:Lipofectamine 2000 CD 和 Optifect

作为一种新制造,Lipofectamine 2000 表现自然地,CD必不可少的事物有区别的于为了的脂质体。 2000。这样1ml即将卖到5000多块的新制造幸运地哪里?首要是鉴于不采取兽出身的素材资料,它可以内容些许特殊询问。,诸如,不包罗兽出身素材资料等。。宁静利害与Lipofectamine 将近2000。24孔板计算,一次2UL,1ML足以转染500次。,但价钱决不小气的。,5000元。。

Optifect 首要设计为鄙人板de条款停止转染。,比方细胞增埴相干情报和细胞学时相干情报的表达和努力间或询问较长的表达学时,细胞浮出水面卵白的表达与努力、若干高通量屏风等也喊叫低水平仪转染。,鉴于Lipofectamine 2000 90-95%麻烦事转染。,optECT是一种选择。。姣姣者密度为30%~70%。,宁静运算及谨慎事项及Lipofectamine 2000关。它也可以直觉的添加到细胞培育物中。,转染前后省掉更新乳清。,也缺少抗菌的。,以及其他。价钱是3616脚步沉重地走。,给药绝对较高。,24孔板一次喊叫3-4UL。,6孔板将应用15~24UL/次。,无论何时计算都比前一次贵。。

三、闻道有先后,术业有专业的,爱因斯坦的宁静家属

LIPOFECTAMINE PLUS:是老版LIPOFECTAMINE的改进版。加成应唱圣歌试剂片会在很宽的眼界内发生高战役力。,不喊叫停止指定之物姣姣者化就可以停止高战役力转染了。试验转换也很复杂。,细胞板密度以转染当天加入度至70%到90%为宜。

DMRIE-C 转染细胞是转染实力难以置信的的细胞。,如Jurkat细胞和宁静淋巴母复制人。。它也可用于用CD转染摇瓶。 悬浮液培育CHO细胞在CHO食物培育基射中靶子培育,关心膨胀。情绪RNA经过DMRIE C转染到贴壁细胞中。。它比应用LIPOFECTIN转染RNA至BHK-21细胞的表达水平仪高。

CELLFECTIN 虫细胞的受优先偿还的权利转染,特别虫情报表达,发生棒状病毒Sf9和Sf21细胞。。

LIPOFECTIN 它已成地应用于人和非细胞的顷刻转染。。质体DNA转染,应用LIPOFECTIN也可以将RNA,寡聚核糖酸,酵母人工染料体和卵白质转变到多个复制人中。

四、正水合氢转染试剂片(由IVI暂代他人职务的谨慎事项)

乳清转染:曾暂且认为乳清可节食转染实力。,除了,提供长DNA -正水合氢脂质体分解的,就缺少乳清。,乳清可用于转染转换。。正水合氢脂质体和DNA的姣姣者下药在应用时会有全部的区别的。,这么,假如你想在转染培养液中做乳清,你喊叫姣姣者化。。大节细胞可以在无乳清食物培育基中赞成安康一些小时。。对乳清缺少绝对敏感的细胞,可以应用OPTI-MEM I培养液。,富含食物的无乳清食物培育基,或在转染培养液中应用乳清。。对乳清缺少绝对敏感的粘附细胞,提议应用LIPOFECTAMINE 2000。

食物培育基射中靶子抗菌的:抗菌的,诸如青霉素G二乙氨基的乙酯和链霉素。,它通常对真核生物无毒。,正水合氢脂质体可养育细胞的透过性。,这么抗菌的就可以进入细胞。。这节食了细胞战役力。,引起低转染实力。。。因而,不应在转染培养液中应用抗菌的。,甚至在预备转染前停止细胞板时也要制止应用抗菌的。不变转染,不要在选择食物培育基中应用青霉素G二乙氨基的乙酯和链霉素。,因这些抗菌的是情报选择的竞争性郁闷物。。独,为了抵押权细胞在无乳清食物培育基射中靶子安康登高,应用比含乳清食物培育基少的抗菌的。。

细胞阻止与培育的退化:细胞适于居住性可经过规定批准搬动阻止。一星期一次或两遍。,不要赞成细胞使洁净超越24小时。。大节已到达的复制人责备整倍体的的。,原代培育包罗表达有区别的结成的细胞的食物混合配料。。细胞培育将在药厂中经验数月和年的短假。,总染料体重组或情报调控的替换。。这引起与转染相干的细胞行动的制作。。假如本人被发现的人这种替换跟随工夫的批准,溶化现代的的管可以回复为了的转染战役力。。比方,新闻的NIH 3T3细胞转染实力高于8代。。温暖气候细胞的较远的批准并缺少节食转染实力。这么,转染实力观察到转染实力为,可以试着转染现代的培育的细胞以回复姣姣者算是。

细胞板密度:转染的姣姣者细胞密度地基细胞典型或A而替换。。普通转染工夫,贴壁细胞密度为70%~90%。,悬浮液细胞密度为2×106-4×106细胞/ml老化果较好。确保细胞在转染转换中在法律上不能实施的或不动。。因转染实力对细胞密度绝敏感。,这么,在有区别的EXP暗中赞成独立根本的批准次是很重要的。。细胞总计的加强可以加强转染战役力和细胞退位。。在三种有区别的密度停止细胞板的较比喻铺板密度难以置信的的,CAT战役力也难以置信的。,试剂片下药类似加强。。这些算是阐明,转染相同的人量O的姣姣者正水合氢脂质体试剂片。

助长者选择:成功高转染战役力所需的助长者依赖于TH。。CMV助长者可以在大节细胞典型中高表达。。宁静助长者,与SV40和RSV比拟,它在BHK-21中具有难以置信的的战役力。。这三种病毒助长者出身于T复制人。,诸如,Jurkat的表达水平仪较低。。转染后转染在食物培育基中做PHA-L和PMA可以活化作用Jurkat细胞中CMV助长者,而单PMA就足以活化作用KG1和K562(人骨髓瘤白血球)射中靶子CMV助长者。SV40助长者的表达在从事大T反日(存依赖COS-1和COS-7)时会养育,因大T反日可以使紧张不安在试管中分解。。

DNA量:高集中的DNA是高效转染的核心。。

顷刻不变表达:转染后转染的DNA转染,转变情报的表达可在1-4天内检测到。。仅有偏袒的转到细胞的DNA被狂喜到起点内停止转会并终极输入mRNA到细胞浆停止卵白分解。几天内,大节外源DNA将被核蛋白质酶恶化或被细胞变稀薄。;一星期后,缺少检测到。。用顷刻EXP检测非重组质体DNA的情报表达。这么,表达水平仪与名列前茅无干。,它不受外周染料体身分的压紧。。顷刻表达辨析喊叫较次的的人工和工夫比不变的EX,除了,有区别的的DNA投篮实力和表达水平仪意见分歧很大。,试验麝香绝谨慎。。不变表达,转变的情报麝香与细胞同一的时刻。。这是真实的当转染质体天然产生的整分解T。。在大批转染的细胞中。,经过重组将DNA添加到情报组中。。遵从DNA的细胞小的。,它麝香经过限度屏风扩大或表型评议。。不变的情报表达试验喊叫一些星期。,假如要认可卵白质一朝分娩,所需工夫较长。。除了,所成功的复制人可以作为卵白质PRO的不变出身。。

顷刻转染和转染实力的概观:该情报的顷刻表达在24~72小时完毕。。这种快的的顷刻表达绝适合于认可质体ExpRe。。可以用讲情报来决定姣姣者先决条件的。,其表达的卵白质关心检测。,靶细胞不含此卵白或低水平仪。。经用的讲情报包罗氯胺苯醇乙酰转变酶(CAT),绿色荧光性卵白(GFP),Luciferase(勒克斯或LUC)和B 半乳糖脂苷酶(b-gal)。B-GAL的表达可以经过复杂的非同位素方式停止检测。。pCMV-SPORT- BGAL质体从事CMV助长者调控的lacZ情报。,转染入真核生物内后可以直觉的表达bgal。嫁复杂的检测搬动,可作为一种简便的、敏捷的转染方式。。

不变转染复制人的屏风:连同带有药物抗性的屏风拉环情报一同转染瞄准情报是到达不变转染复制人最经用的方式。氨基的糖苷酸酸性转变酶情报(APH或NEOR)可分解APH酶,药物酰化失活,为GeNETC18暂代他人职务专一性抗菌的(G418) 蓝矾盐抗性。抗菌的抗药的情报可与靶Ge在同一的质体上。,它也可用于有区别的的质体。。假如同时转染两种有区别的的质体,两个质体很可能性遵从到不变的转变体中。。两种有区别的质体的共转染,带有瞄准情报的质体和带有屏风拉环的质体间的测量为3:1或高地的以抵押权抗性机器人带有转染的瞄准情报。顷刻转染实力的养育也将改革E。比方,应用LIPOFECTAMINE 用正试剂片成功的NIH 3T3细胞GENETICIN抗菌的抗性机器人的数量比独立应用LIPOFECTAMINE加强了大概3倍。不变的表达辨析是喊叫的。,转染后转染的批准细胞,低密度用石板铺,塌下生长合住,在几天或几周内赞成屏风压力。。登高细胞受世袭的抗菌的的压紧大于未分异的登高因子。转染后转染,在开端筛查前推迟直到到达48~72小时。,表达十足量细胞的抗性酶,确保你可以在开端反省时辩护本人。。转染后转染48-72小时倒掉食物培育基,添加从事遗传素抗菌的的食物培育基,抗菌的的浓度是地基给药呼应来决定的。,足以处决未转染的细胞。。因很大水平仪上并发症压紧了Gestin抗菌的的姣姣者浓度,包罗细胞典型,食物培育基浓度和乳清浓度等。,这么,有喊叫对每个细胞作出给药应唱圣歌海湾。,决定姣姣者浓度。屏风可能性喊叫较长工夫,因在致命给药的遗传素抗菌的的存鄙人,,细胞分裂1-2次。。低给药的抗菌的用于阻止培育的细胞。,通常在某种水平仪上的给药。。屏风后,细胞通常是无性系。,地基有区别的的试验瞄准,它们可以划分除杂(机器人)。,搜集浓厚的的培育物或玷污,再做出决定总计。。

卵白质的表达与食物培育基的选择:哺乳兽复制人是可溶的的。,卵白质翻译机后润色,比细菌,在真菌或虫细胞中表达的卵白质更可能性是生物战役力的。。不变转染细胞可分解浓厚的重组卵白,顷刻转染细胞能快的表达。,小分子卵白的快的分解。经用的复制人包罗CHO。,293和COS-7。英维腾为机器人暂代他人职务了29~3个F。,293-H,COS-7和CHO-S细胞,出身于屏风和转染的亚复制人更无效。。这些细胞也可用于无乳清和限两人间的关系身分食物培育基。重组卵白的大规模一朝分娩通常在STA中停止。。这些细胞关心登高到高密度并分解更多的卵白质。。以基质珠为固性赡养者,可使贴壁细胞悬浮液登高。。用于卵白质一朝分娩的细胞转染可在。但更前往应用无乳清食物培育基来表达卵白质。,因乳清卵白阻止顺流而下的表达的除杂。无乳清食物培育基普通旨在一指定细胞典型姣姣者化并有几类无乳清食物培育基不喊叫添加乳清,普通来说,它们从事成分混杂的或浓厚的的卵白质(但很多)。。一种无卵白质但无可能性从事未知院子的无卵白质食物培育基。一种不含卵白质或未知身分的两人间的关系培养液。。多种客套话使您可认为您的应用次选择最正常的的菜单。。用乳清转染的细胞可以合身无乳清食物培育基。,一种缺少卵白质或两人间的关系身分的食物培育基。。在些许形势下(如:,293-H,COS-7和CHO-S),一致的无乳清或无卵白食物培育基的细胞,它可以用它的食物培育基转染。。宁静无乳清食物培育基从事郁闷A转染的构成节。。在这些形势下,在DMEM或OPTI-MEM等食物培育基中停止培育和转染是绝喊叫的。

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FAQ的转染:
同式发育正水合氢脂质体的故障诊断
Q1: 低转染实力

A1:1)未应用姣姣者化的正水合氢脂质体试剂片。。receiver 收音机:选择难以置信的T值的正水合氢脂质体试剂片。见齿顶A或网站。)上“Transfection 馆藏参考书文献平地层。
2)缺少应用姣姣者化先决条件的。。处理提议: 姣姣者化正水合氢脂质体试剂片和DNA的量。。请参阅第七章。。检查网站技术在线分子生物学节的细胞种特性转染搬动。
3)乳清中正水合氢型脂质体试剂片的长。。处理提议: 当长分解的时不要应用乳清。。OPTI-MEM I培养液和DMEM是长分解的的良好培养液。。含乳清食物培育基转染,确保无乳清条款相配物的长。。谨慎:不要OPTI-MEM I食物培育基用于LIPOFECTAMINE 试剂片或虫细胞。Sf9和SF21细胞,Sf-900Ⅱ SFM将收到最好的算是。。
4)在郁闷剂。处理提议: 在食物培育基中不应用抗菌的配制品DNA正水合氢脂质体Co,EDTA,枸橼酸盐,***酸盐,RPMI,蓝矾软骨素,清楚质酸,蓝矾葡多聚糖或宁静硫酰化卵白多聚糖。
5)细胞密度不正常的。处理提议: 转染时细胞密度必然要70%~90%。。
6)主办宴会细胞不克不及辨认DNA转染的助长者向上推起子。处理提议: 确保DNA转染的助长者向上推起子与。
7)正水合氢脂质体呆若木鸡的。。 receiver 收音机:不要应用呆若木鸡的或贮存的正水合氢脂质体,高烧B。
8)转染辨析成绩。处理提议: 在转染辨析中做男性化的对照。。
9)质体除杂的成绩。。处理提议: 请反省质体水平仪除杂试剂片盒可能的选择用于转染。普通应用质体DEAE代表无机硅酮。,最好用重要性流(过滤)代表离心法。,鉴于树脂形成的瑕疵会引起较高的内毒素。。另类的方式可用于一些测量的除杂试剂片盒。,这是从树脂柱中去除质体的不可更改的一步。,将含酒精饮料放在55度的浴缸中5分钟。。不可更改的谨慎地从上至下巴结2/3的含酒精饮料(不要碰到基数)应用。这是缩减树脂穿插瑕疵的一种方式。。

Q2:细胞死亡率高。。
A2-1)DNA太高。。 receiver 收音机:决定姣姣者DNA给药的给药-应唱圣歌海湾。。在给药-应唱圣歌转染中做正水合氢脂质体试剂片。,因DNA自己对细胞登高也有根本的压紧。。参考书第七章重排/姣姣者化方式。。
2)正水合氢脂质体试剂片下药太高。。处理提议: 用给药-应唱圣歌海湾做出决定正水合氢L的姣姣者下药。。在给药应唱圣歌转染中做DNA。,因正水合氢脂质体试剂片只对细胞登高有根本的压紧。。参考书第七章重排/姣姣者化方式。。
3)在转染转换中应用抗菌的。。 receiver 收音机:在转染转换中不要应用氯胺苯醇。,青霉素G二乙氨基的乙酯或链霉素,鉴于正水合氢脂质体试剂片使细胞更敏感。。
4)细胞太少。。 receiver 收音机:应用给药-应唱圣歌海湾来决定姣姣者总计。。地基应用次所需的实力适应小牢房编号。。
5)无乳清条款细胞生机节食。。 receiver 收音机:应用OPTI-MEM I食物培育基。。缩减或迁移无乳清食物培育基射中靶子洗涤频率。。在转染食物培育基中应用5%~10%的乳清。。确保在缺少乳清在的形势下长分解的。。
6)正水合氢脂质体试剂片被使生锈。。 处理方式:不要超额量搅拌或振荡正水合氢脂质体。;这可能性长正水合氢脂质体试剂片的过使生锈物。。
7)不变转染,抗菌的屏风过快。处理提议: 在抗菌的屏风前反正48小时,RES的表达。

正水合氢脂质体- DNA复合沉淀。谨慎:显微镜下可观察到细胞颗粒平常的。。这是常常地的。这种沉淀物的在决不喻TFE的实力。。
A3:1)EDTA过量。。 receiver 收音机:应用DNA水含酒精饮料。,假如是在,应用浓度<的EDTA含酒精饮料变稀薄DNA。2)DNA或正水合氢脂质体试剂片浓度过高。处理提议: 确保正水合氢脂质体试剂片和DNA的浓度不要超越分解的长的提议量(参见表5)。

Q4: 转染结果不好的。。
A4:1) 转染转换中使洁净度的动摇。 receiver 收音机:全部的转染决定因素在有区别的T中都是始终如一的的,如使洁净水平仪,批准的总计总共登高的总计。。
2)细胞培育的替换。。处理提议: 假如可能性,从转染的身高转染亚群中成功的细胞。假如可能性,溶化现代的细胞。

有区别的正水合氢脂质体的故障诊断

CELLFECTIN试剂片或DMRIE-C试剂片
试剂片含酒精饮料费神。 这是常常地的。。在充血气体预先阻止,一定要混合试剂片(倒数5到10)。。
LIPOFECTIN试剂片
Q1:未变稀薄的试剂片浑浊。。 A1:不要应用。。它可能性曾经被解冻或储在4度以下。。
Q2变稀薄后费神:试剂片。 A2:这是常常地的。。未变稀薄的LIPOFECTIN试剂片是弄清的。用OPTI MEM I变稀薄后,相称多云。。
Q3:低转染实力。A3: 在做DNA前将LIPOFECTIN试剂片在OPTI-MEMⅠ(或宁静无乳清食物培育基)中温育30分钟。
LIPOFECTAMINE试剂片
问:荧光性配乐。
A:在免疫的细胞两人间的关系转染后转染会检测到荧光性配乐。LIPOFECTAMINE试剂片自己缺少荧光性。
LIPOFECTAMINE PLUS
Q1:低转染实力
A1:1)试剂片的添加次不正确。。 在稀培养液中混合DNA和试剂片,与将混合同变稀薄的LIPOFECTAMINE试剂片混合。
2):DNA或加成应唱圣歌物在变稀薄前混合不好的。。 在混合前确保每个孔都终止地混合。。在停止预复合的变稀薄食物培育基中做DNA和PLUS试剂片的次不压紧转染战役力。3)缺少应用LIPOFECTAMINE试剂片。 确保在做到细胞前将DNA-PLUS试剂片分解的同变稀薄的LIPOFECTAMINE试剂片混合并温育。
LIPOFECTAMINE 2000
Q1:低转染实力。
A1:1)在OPTI-MEMⅠ中配制品的变稀薄剂,确保变稀薄的LIPOFECTAMINE 2000在30分钟内与变稀薄的DNA混合。。2)假如应用D-MEM作为变稀薄剂。,细胞密度过低,在3分钟内用变稀薄的DNA停止转染。。转染后细胞使洁净水平仪必然要90%。。

Q2:复杂含酒精饮料费神。 A2:这是常常地的。